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defgf96tj · Wysłany: Śro 8:00, 02 Mar 2011 Temat postu: ghd stijltang 单克隆&#2523

单克隆抗体用于免疫荧光技术快速检测副流感病毒3型抗原的研究
l材料和方法1．1■晤部脱落细胞标本i00例采自3个月一6岁下呼吸道感染住院患儿,[link widoczny dla zalogowanych]；55例采自成人呼吸道感染住院患者．1．2双份血清标本由上述i00侧小儿患者中,[link widoczny dla zalogowanych]，采集到的33例急性期与恢复期双份血清。1．3抗体PIV一3混台McAb(6株8个单位的McAb的混合物)：本奄研制：PIV一1、23型混台McAb：由WHO流感中心Shotridge教授惠赠；兔抗PIV一3血清：购自中国预防医学科学院病毒研究所；羊抗鼠IgG荧光标记物及羊抗兔荧光标记物：均购自卫生部北京生物制品研究所1．4试剂IfV一3血凝索抗原与霍乱弧菌滤液(即受体破坏酶RDE)：购于中国北衰军区总医院¨蚌埠医学院预防医学科学院病毒研究昕；1％豚鼠血球：本室制备。1．5IFA捡聋法取鼻咽部脱落细胞涂片，吹干，加O．2牛血清蛋白15,',-2O封闭，37℃15mia，然后进行荧光染色。一抗加PIV一3混合McAb二抗加羊抗鼠IgG荧光标记物。每例以找到3个以上典型荧光着色细胞者为PIV一3抗原检测阳性同时以PIV—l23型混合McAb和兔抗PIV一3血清分别做IFA检测PIV一3抗原(对照试验)=1．6双份血清中抗PlY一3抗体效价翻定按黄祯祥主编的医用病毒学基础与实验技术一书(1990年)中的血凝抑制半加敏法(HI)进行。1．7特异性试验④取代试验以196正常小鼠血渍取代PIV一3混台McAb做IFA，检查10洌典型的PIV一3抗原阳性细胞涂片：②阻断试验：另取lD例典型的PIV一3抗原阳性细胞辣片及PlY一3标准病毒涂片，分刷加兔抗PIV一3血清l5—2Dul，37℃作用3Dmin．洗涤皤依次加PI、3混合Mcab及革抗鼠IgG荧光标记物．进行荧光色2结果和讨论IFA法梭IPIV一3抗原的结果见表l…．．…——一——一一——，一．咀●●【．、母／．一／一，，1，64表I3种IFA检测PIV一3抗原的比较(12=155)主法臻鹱篱PIV一3f昆台McAb—IFA3220．6PIV一1、2，3混台McAb—IFA4830．9抗PIV一3血清一IFA3421．9由表1看出，以PIV—I、2、3混台McAb的检出率最高。小儿与成年患者细胞涂片中检出PIV。_3抗原的情况见表2由表2中可以看出，小儿患者PIV-3抗原检出率()较成人患者约高2—3倍表23种IFA法检出小儿与成人患者细胞涂片中PIV_3抗原的比较33倒患儿双份血清血凝抑制抗体的检测结果：此33饲中有8倒在PI卜3混台McAb—IFA抗原检测中为阳性结果，其中7钟双份血清呈阳性(恢复血清抗体比急性期血清抗体呈4倍以上升高)．1倒为阴性(仅有抗体两倍升高),[link widoczny dla zalogowanych]，此倒为3个月的幼婴．其它2s倒阴性结果与抗原检铡l0O捅符。值得提出的是．33倒患儿的急性期有90抗体为阳性(抗体效价≥1：10)。特异性试验结果：正常小鼠血清的替代试验和以兔抗PIV一3血清对阳性标本的阻斯试验均为明性，表明PIg一3抗原的检出是特异的在3种抗体做IFA检测的细胞涂片抗原中，以PI、r_1,[link widoczny dla zalogowanych]，2、3混☆MeAb的敏感性最高，高于其它两种抗体约l0％，但作者认为有部分阳性结果不是PIV一3，而是PIV一1和PI、r_2HAI结果中有1例阳性结果未检出，此例出现在3个月的幼婴。通过以PIV一3McAb进行IFA诊断，证实了PIV一3在小儿下呼吸道感染以及在成人呼吸道感染的重要性它在小儿患者中的检出率为25．在成人中为12．7，仅次于呼吸道合胞病毒,[link widoczny dla zalogowanych]，此结果与国内外报道一致。抗体检测中有90患儿在急性期星阳性(效价≥1：lo)，表明小儿患者Pig一3感染的普遍性．
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