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defgf96tj · Wysłany: Sob 19:35, 05 Mar 2011 Temat postu: UGG ブーツ浅&#3

浅谈免疫组织化学中的显色问题
免疫组织化学的不断发展，给临床病理和科研项目带来了很大的帮助,[link widoczny dla zalogowanych]。在免疫组织化学染色操作中，显色是一个很重要的环节。在sP法等常用免疫组化方法中，标记抗体的酶主要有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)，显色剂有二氨基联苯氨(DAB)、3-氨基一9一乙基咔唑(AEC)、5．溴4氯一3吲哚磷酸盐／氯化硝基四氮唑蓝(BCIP／NBT)、固红和固蓝等。用DAB做了上万例染色，结果稳定，现将方法介绍如下。1材料和方法1．1材料各类肿瘤，疑难病例等病理组织切片。1．2方法按照免疫组化SP染色法操作至显色。以福州迈新生物技术开发公司的DAB显色试剂盒为例，显色液具体配制程序如下：在小试管中加0．85ml的蒸馏水，再依次加入缓冲液50l、底物H：O：50、DAB显色剂50l，并充分混匀，即成1ml的DAB显色液。可显色10～15张切片，如要同时显色更多切片，按比例增加溶剂。每张切片加100“l新鲜配制的DAB溶液，显微镜观察掌握显色时间。以后继续按照SP染色法操作至结束。2结果按以上方法，所有免疫组化染色切片中，标记定位准确，背景清晰者占绝大多数；极少部分因显色过度导致背景底色深，非特异性染色较强。3讨论3．1按顺序操作显色液的配制应严格按照说明书标明的滴加顺序操作，正确的配制顺序是先加蒸馏水，再加缓冲液，接着是底物H：0：，最后才是DAB显色剂。如顺序错误，将影响显色结果。同时要注意校正蒸馏水的pH值(7．0)，以确保实验结果的正确性。如出现沉淀，要过滤后才能使用。DAB作者简介：陈罡，男，瑶族，博士研究生，住院医师，助教，从事临床病理诊断,[link widoczny dla zalogowanych]，病理教学和科研工作。应新鲜配制，配制好的溶液要避光存放，20分钟内有效。3．2显色时间的控制染色前应充分观察常规切片，了解HE染色情况,[link widoczny dla zalogowanych]，尽可能找出阳性内对照部位，如Cytokeratin(细胞角蛋白)所标记的正常上皮等。显色时，一定要在显微镜下控制染色的深浅，以内对照部位出现稍浓于目的色的时间为该片的显色时间；在无阳性对照的情况下，可选择切片内的红细胞(RBC)为片内对照，一般RBC略变色即可。同时最好有阳性片对照。由于不同的抗体、不同组织、不同气温、水质等因素都对显色有影响，所以不能绝对固定显色时间。显色时间可在5―15分钟，如室温较高，时间应缩短,[link widoczny dla zalogowanych]；室温较低，则应延长，但也不可超过15分钟，否则背景易上色。3．3致癌作用DAB的致癌作用是应重视的问题，不仅要尽量避免对操作者的污染，还要防止对环境和他人的污染。3．3．1器皿专用配制过程中的器皿和显微镜要专用,[link widoczny dla zalogowanych]，在观察时DAB难免要污染显微镜，特别是滴染显色常带着显色液观察，如不专用极易对他人造成污染。每次使用完毕的器皿和显微镜，都要擦洗干净。3．3．2防止污染周围物品镜下控制显色程度时，要特别注意防止污染，尽量不要把显色液滴到台面及显微镜上，也不要溅到衣物上和皮肤上。3．3．3固定地点从配制到显色结束的整个操作过程应在固定的桌面上进行，这样可以使DAB的污染面积降到最小，清洗也容易。3．3．4集中处理擦拭用纸显色过程中的擦拭用纸等要定期用硫酸液中和处理后再集中丢弃，这也是防止污染他人的必要措施l3J。
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